什么是膜片钳技术?

什么是膜片钳技术?

根据研究对象,可以使用不同的配置。在细胞贴附模式下,膜片保持完整(参见图3)。松散贴片是细胞贴附模式的修改版。这种情况下,移液器没有紧密封接在细胞膜上,而是松散地贴附在细胞膜上。该模式通常用于记录神经元细胞中的动作电位。它的优点在于细胞质的成分不受影响。不过,另一方面,细胞内环境无法控制。

通过电极微管施加造孔剂(通常为抗生素)会产生穿孔膜片来保证离子连续性,同时细胞内蛋白质不会被电极液洗掉。最常用的膜片钳模式是全细胞模式(参见图3)。要实现这种模式,通过短暂施加强吸力来破坏膜片。微电极内部与细胞质连为一体。该方法用于记录来自整个细胞的电位和电流。对于全细胞测量方式,研究人员有两种配置方式可供选择:电压钳模式,其中电压保持恒定并记录电流,或者电流钳模式,其中电流保持恒定并观察膜电位的变化。

此外,也可以仅记录来自小块而不是整个细胞的电流。这增加记录单个离子通道的机会。膜片可以根据微电极内部的两个不同方向确定方位。为实现内面向外的配置,微电极贴附在细胞膜上,并且可以收回以撕下一小片膜(图3)。本例中,细胞膜的胞质表面暴露在外面。这种方法通常用于研究单个通道的活性,优点在于可以调整暴露在细胞内表面的培养基。

如果希望研究细胞外诱因(如神经递质)的影响,则应选择外面向外的配置(参见图3)。这种情况下,移液器在全细胞测量配置中收回,导致细胞膜破裂并重组。在该配置中,细胞外表面暴露,因此可以轻松应用细胞外诱因。

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